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DNA/RNA和蛋白互作
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Cut&Tag
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  • 產(chǎn)品描述

    CUT&Tag技術(shù)的核心是在Tn5上融合了protein A/G抗體結(jié)合功能域的轉(zhuǎn)座體pAG-Tn5。在進(jìn)行CUT&Tag實(shí)驗(yàn)時(shí),首先進(jìn)行靶蛋白特異性抗體(一抗)孵育,使抗體進(jìn)入細(xì)胞與靶蛋白結(jié)合。為了放大信號,同理接著進(jìn)行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5轉(zhuǎn)座體,使得轉(zhuǎn)座體進(jìn)入細(xì)胞并與抗體結(jié)合,這樣就把轉(zhuǎn)座體間接的固定在靶蛋白上,隨后激活Tn5酶的切割活性,切斷靶蛋白結(jié)合的DNA區(qū)域。由于Tn5連有測序接頭,在打斷的同時(shí)直接在片段化的DNA上加接頭,接著提取DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增構(gòu)建文庫。
    盡管CUT&Tag與ChIP方法在某些方面類似,但CUT&Tag實(shí)驗(yàn)的起始材料是活的可滲透細(xì)胞或分離的細(xì)胞核,而不是ChIP-seq中使用的甲醛交聯(lián)的細(xì)胞或組織。CUT&Tag有望將蛋白與染色質(zhì)DNA互作的研究變成了一種類似PCR反應(yīng)的常規(guī)操作,對基因調(diào)控、表觀遺傳等領(lǐng)域的研究具有重要的意義。

    產(chǎn)品優(yōu)勢

    更好的信噪比和更低的背景;
    樣本起始量低,測序通量高,單堿基分辨率;
    檢測整個(gè)基因組中的蛋白質(zhì)/DNA結(jié)合和組蛋白修飾位點(diǎn);
    精確定位蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合位點(diǎn);
    靈敏度高,可以檢測細(xì)胞中少至幾個(gè)拷貝的稀有片段;

    實(shí)驗(yàn)流程
  • 數(shù)據(jù)分析

  • 樣本類型建議送樣量存儲介質(zhì)保存、運(yùn)輸條件
    新鮮細(xì)胞>30w有10%FBS的常用培養(yǎng)基碎冰運(yùn)輸,冰袋運(yùn)送注意溫度勿過低導(dǎo)致懸液凍結(jié)
    凍存細(xì)胞>30w凍存液(10%DMSO,30%血清(FBS)培養(yǎng)基)-80℃保存,干冰運(yùn)輸
    動(dòng)物組織>30mg/-80℃保存,干冰運(yùn)輸
    植物組織>500mg/預(yù)冷的錫箔紙包裹儲存在-80°C,干冰運(yùn)輸



  • 研究方向/思路
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